關于印發(fā)農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范的通知
聯(lián)防聯(lián)控機制綜發(fā)〔2020〕221號

各省、自治區(qū)、直轄市及新疆生產(chǎn)建設兵團應對新冠肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制（領導小組、指揮部）：

為科學規(guī)范指導開展農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新冠病毒環(huán)境監(jiān)測工作，深入開展病毒溯源和疫情防控，我們組織編制了《農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范》?，F(xiàn)印發(fā)給你們，請參照執(zhí)行。

國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制綜合組
2020年7月30日

（信息公開形式：主動公開）

農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新型冠狀病毒環(huán)境監(jiān)測技術規(guī)范

農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場是新冠肺炎疫情防控的重點場所，加強對農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新冠病毒環(huán)境監(jiān)測，對于深入開展病毒溯源和疫情防控意義重大。為科學規(guī)范指導開展農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場新冠病毒環(huán)境監(jiān)測工作，特制定本技術規(guī)范。

一、監(jiān)測對象

監(jiān)測重點為具備區(qū)域輻射能力的大型農(nóng)貿(mào)（集貿(mào)）市場，特別是包括冷凍、冷藏功能的肉類和海鮮水產(chǎn)交易攤位，或者存在潮濕、密閉空間的市場。

二、監(jiān)測內(nèi)容

（一）市場內(nèi)重點攤位的設施、用具表面病毒檢測。重點對攤位臺面、面板、地面、把手，以及各種制作和使用器具等表面，包括脫毛或切割機械、刀具等，采集拭子樣本。

（二）市場內(nèi)重點攤位從業(yè)人員咽拭子、衣物表面、手部病毒檢測。對處于工作狀態(tài)的從業(yè)人員手部表面，采集拭子樣本。

（三）市場內(nèi)重點攤位存放食品的冰箱、冷藏柜內(nèi)部表面病毒檢測。對儲藏食物過程中經(jīng)常觸及的冰箱、冷藏柜內(nèi)表面，采集拭子樣本。

（四）市場內(nèi)銷售的肉、禽類和海鮮水產(chǎn)類食品的病毒檢測。對市場內(nèi)銷售的食品應當按照無包裝食品和有包裝食品加以區(qū)分，其中有包裝類食品重點是需要冷藏運輸?shù)娜?、禽類和海鮮水產(chǎn)類食品，采集拭子樣本。

（五）市場內(nèi)排水系統(tǒng)中污水的病毒檢測。重點包括市場內(nèi)海鮮水產(chǎn)、肉禽類產(chǎn)品攤位來源的污水，采集拭子樣本或污水樣本。

（六）市場內(nèi)公共空間中人員接觸較多的部位，包括主要進出口的電梯按鈕、樓梯扶手、門把手表面，茶水間、衛(wèi)生間等公用設備設施表面，潮濕的公共通道和衛(wèi)生間地面、墩布池等采集拭子樣本。

（七）市場內(nèi)經(jīng)常性跨區(qū)域移動的工具或物品，包括垃圾車、垃圾桶、墩布等清潔工具，轉(zhuǎn)運物品的拖車等，采集拭子樣本。

（八）市場內(nèi)工作人員聚集、通風不良的環(huán)境，包括辦公室、工具間、休息間、局部交易環(huán)境等環(huán)境拭子及氣溶膠樣本。

三、樣本采樣

（一）樣本要求。

1.從業(yè)人員咽拭子、手部、衣物和其他物體表面拭子樣本：要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集的手部或物體（包括公共通道的地面）的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對采樣對象表面，進行多點分布式采樣。

2.食品表面拭子樣本：食品樣本不可直接進行采集，應當首先將擬采集的食品小心分離，并存放于潔凈采樣袋后，再進行拭子樣本的采集。要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分布式采樣。

3.污水樣本：按照市場內(nèi)排水系統(tǒng)分布情況，選取2-3處污水采樣位置，重點為內(nèi)部管網(wǎng)匯集處、水流方向的下游或與市政管網(wǎng)的連接處。采集拭子樣本要求，用采樣棉簽浸入污水中，使其吸附污水并在采樣管中對涮洗3次以上。采集污水樣本要求，用聚乙烯塑料瓶收集30-500mL污水水樣；大于500mL體積的污水采集可以使用聚乙烯塑料桶或現(xiàn)場水樣專用富集設備。同時要滿足對污水采樣位置，進行多點分布式采樣。

4.動物樣本：對于活體動物，可分別用采樣棉簽采集其體表拭子、口咽拭子和肛拭子，也可以采集其排泄物或分泌物樣本，并在記錄單上進行相應記錄。對于以經(jīng)過剝皮等處理的動物樣本，分別用棉簽采集其體表和體腔拭子樣本，要求用病毒采樣管中的病毒保存液，充分浸潤采樣棉簽后，對擬采集食物樣本的表面重復涂抹、涮洗3次以上。同時要滿足對樣本表面，進行多點分布式采樣。

5.其他器具：籠具或魚缸等裝運、養(yǎng)殖動物的容器，需首先觀察或了解該容器具體存放、養(yǎng)殖過的動物類型，采集容器內(nèi)壁拭子樣本或內(nèi)容物液體樣本。

6.人員聚集、通風不良的局部交易區(qū)域、辦公室、休息間等環(huán)境采集氣溶膠樣本。

（二）采樣方法。

1.采樣周期：對重點大型集貿(mào)市場（特別是銷售生鮮類產(chǎn)品的市場）按照1次/周，對其余需要監(jiān)測的集貿(mào)市場按照1次/月的頻次進行病毒監(jiān)測。

2.采樣實施：現(xiàn)場采樣由兩名以上的工作人員參與完成，采樣時應當穿戴防護服、防護口罩、鞋套和醫(yī)用一次性手套。采樣過程需開啟現(xiàn)場采樣視頻記錄設備。

3.采樣裝備：病毒采樣箱、病毒采樣管、氣溶膠采集器、樣品記錄單、手消設備、潔凈采樣袋、冰袋、高危險生物樣本轉(zhuǎn)運箱和生物安全垃圾袋等。

4.采樣記錄：樣本信息應當包括樣本采集的采樣時間、地點、集貿(mào)市場名稱、攤位編號、采樣類型、樣本編號以及采樣人等信息。

5.采樣操作：采樣開始前，要求穿戴防護服、口罩、鞋套和手套等個人防護用品進入采樣現(xiàn)場，并使用手消進行手部消毒。拭子樣本采樣過程中，采樣棉簽只能接觸當前采集的樣本，避免觸碰到其他物體。污水樣本采集前，先充分攪勻，然后取樣。污水分三層以上，不能攪勻時，可按各層量的多少的比例分層取樣。氣溶膠樣本采集使用氣溶膠采集器，設定采集高度、空氣通量和采集時間，進行氣溶膠采集，將采集后的吸收液或濾膜放置在特定的低溫容器進行轉(zhuǎn)運。采樣結束后，清理廢棄物后離場。

6.樣品轉(zhuǎn)運：采集樣品連同采樣記錄單應當在24小時內(nèi)運送至當?shù)刂付ǖ牟《颈O(jiān)測機構進行檢測，樣本建議冷藏存放于高危險生物樣本轉(zhuǎn)運箱中，并由專人、專車進行轉(zhuǎn)運。

四、檢測

（一）樣本分裝和保存。

1.樣本分裝：標本采集后應當在生物安全二級實驗室生物安全柜內(nèi)分裝，但個人防護裝備參照生物安全三級實驗室的防護要求。所有采集對環(huán)境標本應當分裝到大小適合的帶螺旋蓋內(nèi)有墊圈、耐冷凍的樣本采集管里，按照1000ul/管進行分裝。容器(采集管)外注明樣本編號、種類及采樣日期。用于后續(xù)核酸提取和病毒分離等實驗室檢測工作。

2.樣本保存：用于病毒分離和核酸檢測的標本應當盡快進行檢測，能在24小時內(nèi)檢測的標本可置于4℃保存；24小時內(nèi)無法檢測的標本則應當置于-70℃或以下保存（如無-70℃保存條件，則于-20℃冰箱暫存）。

（二）污水水樣前期處理。使用離心技術去除污水中雜質(zhì)。先打開低溫離心機，待溫度降至4℃左右，建議4654離心力離心30分鐘，取上清。再使用膜吸附技術或超濾技術進行上清液的濃縮。

（三）核酸提取。新型冠狀病毒的常規(guī)檢測方法是通過實時熒光RT-PCR鑒定。任何新型冠狀病毒的檢測都必須由經(jīng)過相關生物安全及技能培訓的人員進行操作。對已經(jīng)滅活的樣本，應當在生物安全二級（BSL-2）實驗室內(nèi)，使用自動化核酸提取儀，配套核酸提取試劑盒進行病毒核酸的提取。核酸提取后，應當將核酸產(chǎn)物進行分裝，用于后續(xù)核酸實時熒光定量（RT-PCR）及深度測序。核酸提取操作參考相關廠家試劑盒說明書開展。

（四）實時熒光定量PCR。在BSL-2實驗室中對所有已提取的核酸樣本，應當用經(jīng)CFDA批準的RT-PCR診斷試劑進行新型冠狀病毒核酸檢測，以保證實驗結果的正確可靠。RT-PCR反應體系和操作參考相關廠家試劑盒說明。每一次RT-PCR反應均應當設置陰性對照、陽性對照和無模板空白對照，以確保擴增體系工作正常。

五、實驗室生物安全

實驗室安全級別參照最新版《新型冠狀病毒實驗室生物安全指南（第二版）》的相關內(nèi)容進行管理。采集的環(huán)境樣本屬于未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料，在采用可靠的方法滅活前進行的病毒抗原檢測、血清學檢測、核酸提取、生化分析，以及臨床樣本的滅活等操作，應當在生物安全二級實驗室進行，同時采用生物安全三級實驗室的個人防護。環(huán)境樣本在采用可靠的方法滅活后進行的核酸檢測、抗原檢測、血清學檢測、生化分析等操作應當在生物安全二級實驗室進行。

附表：新型冠狀病毒環(huán)境檢測標本送檢表

附表